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光色调控紫色光养细菌在菌群中的增殖与联产生物产品 | 白光提高丰度、红光提高色素与蛋白

以猪肉加工废水为基质、以天然菌群为对象,比较白(465 nm)、蓝(473 nm)、黄(564 nm)、红(616 nm)四种LED光色对紫色光养细菌(PPB)的影响。初始菌群PPB丰度仅12%;白光使PPB升至76%并以 Rhodopseudomonas 为主导,同时最大化生物量、PHB积累与COD去除(约70%);红光虽抑制PPB增殖(约17%)、多样性最高,却使细菌叶绿素(约6300 mg/g CDW)、类胡萝卜素(约400 mg/g CDW)与蛋白产率最高。10天光照电费为白光/红光1.65美元、蓝光/黄光1.10美元。

光色调控紫色光养细菌菌群结构与丰度生物产品联产猪肉加工废水
💡 核心结论:光色可作为调控混合菌群中PPB竞争地位的工具:白光(465 nm)使PPB丰度由12%升至76%、生物量、PHB与COD去除率最高,而红光(616 nm)抑制PPB增殖但使细菌叶绿素、类胡萝卜素与蛋白产率最高,说明生长与产物的代谢权衡可由光色定向选择。
📑 目录

文献信息

英文题名
Light color-based proliferation of purple phototrophic bacteria in a microbial consortium for sustainable wastewater treatment and bioproduct generation
作者
Chewapat Saejung, Sasiwan Akkahat
期刊 / 年份
Bioresource Technology 2026(2025年9月29日在线发表)
DOI
10.1016/j.biortech.2025.133411
卷期 / 页码
Volume 440, Article 133411
单位
泰国孔敬大学理学院微生物学系(Department of Microbiology, Faculty of Science, Khon Kaen University, Khon Kaen 40002, Thailand)
一句话概括:研究以天然水样经稀释—刺激/稀释—绝迹法富集含PPB的菌群,再分别用白、蓝、黄、红四种单色LED在猪肉加工废水中培养10天,结合16S rRNA扩增子测序与生物量、色素、蛋白、PHB、COD测定,评估光色对菌群结构与产物产量的调节作用。

一图不看也要知道的几件事

  • 富集阶段用暖白光LED(455 nm蓝峰、照度4000 lx、无波动)在覆盖无菌石蜡油的不产氧条件下培养约1个月,培养液转为红色即提示PPB存在;随后经稀释-刺激(10^0、10^−2、10^−4、10^−6)与稀释-绝迹(10^−2至10^−8)筛选,选出10^−6稀释度作为初始含PPB菌群。
  • 实验用4种光色LED:白(465 nm)、蓝(473 nm)、黄(564 nm)、红(616 nm),强度均4000 lx、每泡9 W、距反应器外壁20 cm、24 h连续光照,实验为期10天;废水为猪肉加工废水(pH 6.8,20% v/v),每处理3个平行各3 L。
  • 猪肉加工废水COD 448.701±32.500 mg/L,TOC 217.551±51.201 mg/L,TN 208.910±12.001 mg/L,TKN 208.881±21.551 mg/L,总磷1.501±0.400 mg/L,脂肪110.000±17.320 mg/L;C:N:P为145:139:1,C/N极低。
  • 初始菌群中PPB属 Rhodopseudomonas 与 Rhodomicrobium,Rhodopseudomonas 为第三大菌,相对丰度仅12%(该低丰度可能与所用暖白光的蓝峰455 nm刺激不足有关)。
  • 白光处理使 Rhodopseudomonas 丰度显著升至76%;PPB总丰度排序为白光(约75%)>黄光(约69%)>蓝光(约51%)>红光(约17%)≈初始菌群(约12%),组间显著性分组为A/AB/BC/D/D。
  • 红光下 Pseudomonas、Dysgonomonas mossii、Paraclostridium 等化能异养菌保持较高比例;红光处理α多样性(Shannon约3.05、Simpson约0.91、Chao1约1020、ACE约1040)为四处理最高,白光最低(Shannon约1.2、Chao1约450)。
  • 核心微生物组由5个类群构成(初始菌群、白、红、黄、蓝共有的IWRYB):D. mossii、Rhodopseudomonas、M. fermentans、A. propionicum、Paraclostridium。
  • 细菌叶绿素产率红光最高(约6300 mg/g CDW,显著性A组),蓝、白、黄相近(约4100–4200);类胡萝卜素同样是红光最高(约400 mg/g CDW),其余约250–270 mg/g CDW。
  • 生物量(g/L)白(约1.43)与黄(约1.50)最高(A组),蓝居中(约1.25,AB),红最低(约0.82,C);PHB产率白光最高(约3.4 mg/g CDW,A组),蓝(约2.3)、红(约2.5)、黄(约2.2)为B组。
  • 蛋白产率红光最高(约800 mg/g CDW,A组),蓝(约740)、白(约700)、黄(约670)差异不显著(AB组,p≥0.05)。
  • COD去除率白光最高(约70%,A组),黄光次之(约65%,AB),蓝光(约34%,BC),红光最低(约22%,C)。
  • 10天光照电耗与费用:蓝光与黄光各8.64 Kw、1.10 USD;红光与白光各12.96 Kw、1.65 USD。
  • 序列数据存放于NCBI BioProject PRJNA1312338。

研究背景与要解决的问题

可持续污水处理与增值产物联产是环境研究的方向之一。PPB能利用光能在厌氧条件下处理污染物并合成有价值的生物分子,相比微藻光需求低、相比化能异养菌无需曝气,具备代谢灵活性,可把有机废物转化为生物燃料与生物塑料等产品。

但传统上依赖PPB纯培养的路线存在瓶颈:分离与维持纯培养费时费钱,且在真实废水中常被土著微生物竞争抑制,功能效率下降。使用天然含PPB的混合菌群更具成本效益,然而PPB生长速率通常慢于异养菌,易被淘汰、丰度低,从而削弱其处理与产物的贡献。因此需要一种能选择性促进菌群内PPB增殖的策略。

光是影响PPB生长与代谢的最关键因素。已有关于纯培养的研究证实光色影响PPB生长与产物,例如蓝光(470 nm)优化 Rhodopseudomonas palustris 生长;但对混合菌群中PPB的竞争动态与生态平衡如何受光色影响尚不清楚,光色能否作为调控整个群落、选择性富集PPB的工具此前未有研究。

概念与技术边界

PPB(紫色光养细菌)
一类利用细菌叶绿素与类胡萝卜素进行不产氧光合作用的细菌,能吸收红外/长波长光,兼具自养与异养代谢能力。
光色/波长
不同颜色的LED对应不同中心波长;色素吸收谱决定PPB对某一光色的利用效率,从而影响其生长与产物分配。
稀释-刺激与稀释-绝迹法
通过逐级稀释接种以降低菌群复杂度、筛选出可用目标底物的简化菌群的富集策略。
PHB(聚羟基丁酸酯)
PPB在营养不平衡时积累的胞内聚酯,可作生物塑料原料,其前体为乙酰-CoA。
核心微生物组
在所有处理与初始菌群中均存在的共有类群,被认为维系菌群的基本结构与功能。
B800-850型LH2复合体
PPB膜上的一种捕光复合体,在白光广谱照射下形成,可跨广谱(尤其近红外800–850 nm)高效获取能量。

体系与方法

环节做法与参数
菌群富集取孔敬大学水库水样10 mL与90 mL人工培养基(10 g/L废弃食用油、2.0 g/L酵母提取物、0.5 g/L K2HPO4、0.5 g/L KH2PO4、0.8 g/L (NH4)2HPO4、0.2 g/L MgSO4·7H2O、0.053 g/L CaCl2·2H2O,pH 6.8)混合,覆无菌石蜡油、暖白LED(455 nm,4000 lx)室温(28–32℃)培养约1个月至变红,再转接新培养基扩增。
稀释筛选以猪肉加工废水替代培养基,按稀释-刺激法依次作10^0至10^−6稀释,每级培养7天;再以稀释-绝迹法作10^−2至10^−8稀释、培养7天,测OD660,选细菌密度最高的稀释度作为初始含PPB菌群。
光色处理菌群先在食用油培养基中于32℃、暖白LED 4000 lx预培养96 h,调OD至0.5后按20%(v/v)接入猪肉加工废水,容器填满以建立不产氧条件;分白、蓝、黄、红四组,每组3平行各3 L,LED 9 W/泡、距外壁20 cm、连续24 h、4000 lx、避环境光,培养10天。
废水与产物分析TOC用Multi N/C 2100S分析仪;亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、TKN、总磷按APHA(2017)标准法;脂肪酸用Shimadzu Nexis GC-2030(Rt-2560柱,氦载气,进样225℃、检测285℃,柱温100℃保持4 min后以3℃/min升至240℃保持15 min)。生物量以OD660换算CDW;蛋白用NaOH裂解煮沸后分光光度法;色素以甲醇-丙酮(2:3 v/v)提取;PHB按Laranja等(2014)方法,将PHB转化为巴豆酸后于235 nm测定。
分子分析0.22 µm PES膜富集后以ZymoBIOMICS DNA Miniprep Kit提取DNA;V3–V4区341F/806R引物扩增,Illumina NovaSeq 250 bp双端测序;PANDAseq合并、CD-HIT聚类、VSEARCH去嵌合、QIIME2 classify-sklearn(Greengenes,置信度0.7)注释OTU;α多样性用R的vegan与fossil包。
统计分析IBM SPSS 28.0.0.0单因素方差分析,p<0.05为显著;柱状图上方大写字母表示处理间显著性分组。

主要结果(原文图表逐条解读)

Graphical Abstract(图形摘要):光色调控含PPB菌群用于污水处理与生物炼制。(原图为图形摘要,非编号Figure,按版面首图引用)
Graphical Abstract(图形摘要):光色调控含PPB菌群用于污水处理与生物炼制。(原图为图形摘要,非编号Figure,按版面首图引用)
图示信息:左侧为盛有红橙色菌液的玻璃瓶照片;中部为白光与红光之间的循环箭头,白色标签列出PPB丰度、生物量、COD去除、PHB,紫色标签列出类胡萝卜素、蛋白、细菌叶绿素;下方为六幅(a–f)对比不同光色响应的小柱状图;右侧虚线框总结为“面向一体化污水生物炼制的简单低成本平台”。
论文结果:白光对应提高PPB丰度、生物量与PHB;红光对应提高细菌叶绿素、类胡萝卜素与蛋白,构成“增殖”与“产产物”两类目标的光色分工。
研究意义:概括了以光色为杠杆在同一菌群中切换“增产菌体”与“增产高值产物”两种运行模式的思路;作为摘要图不含新的定量数据。
Fig. 1:初始菌群中细菌OTU的分类学分布,依次展示(a)门、(b)纲、(c)目、(d)科、(e)属、(f) OTU水平。
Fig. 1:初始菌群中细菌OTU的分类学分布,依次展示(a)门、(b)纲、(c)目、(d)科、(e)属、(f) OTU水平。
图示信息:六幅堆叠柱状图,纵轴为相对丰度(0–1),分级呈现单一样本(初始菌群)的分类组成,各面板右侧附颜色图例。
论文结果:门水平以Bacteroidota为主(约70%),Pseudomonadota约15%,另有Firmicutes、Desulfobacterota、Fusobacteriota、Gemmatimonadota等;纲水平以Bacteroidia为主(约75%),Alphaproteobacteria次之;属水平以 Dysgonomonas(约40%)与 Macellibacteroides(约30%)领先,Rhodopseudomonas 约15%;OTU水平以 Dysgonomonas mossii_OTU_17114(约43%)、M. fermentans_OTU_313809(约17%)、Rhodopseudomonas_OTU_306188(约15%)为主。
研究意义:初始菌群非光养菌占绝对优势,Rhodopseudomonas 仅为第三大菌(12%),说明天然菌群中PPB天然丰度低,需额外选择压方能提升;图中各水平读值为图形估读,精确值以附表S1为准。
Fig. 2:蓝、红、白、黄光照射下菌群的OTU分类学分布,分为(a)门、(b)纲、(c)属、(d) OTU水平。
Fig. 2:蓝、红、白、黄光照射下菌群的OTU分类学分布,分为(a)门、(b)纲、(c)属、(d) OTU水平。
图示信息:四幅堆叠柱状图,纵轴为丰度(0–1.00),横轴为四个处理样本(Blue、Red、White、Yellow)。
论文结果:各处理均以Pseudomonadota为主导,但红光样本差异最大,Firmicutes约占一半、Pseudomonadota明显降低;纲水平Alphaproteobacteria总体占优(白光几乎占满),Gammaproteobacteria在蓝光与红光中丰富,红光还含Bacilli与Clostridia;属水平 Rhodopseudomonas 几乎占满白、黄样本并约占蓝样本一半,红光样本则较为均衡,含 Pseudomonas、Dysgonomonas、Acinetobacter、Aeromonas、Citrobacter、Lysinibacillus 等;OTU水平 Rhodopseudomonas_OTU_306188 约占蓝样本一半、几乎占满白与黄样本,红光最为异质。
研究意义:相比初始菌群,蓝、黄、白光均提高了PPB属与种的比例,而红光未能有效富集PPB、反而利于化能异养菌;结果显示白、黄样本为低多样性、Rhodopseudomonas主导的群落。
Fig. 3:不同光处理下菌群微生物群落的相对丰度。(a) 相对丰度热图(*标注PPB类群);(b) 各处理的PPB相对丰度(柱上大写字母表示p<0.05的显著性差异)。
Fig. 3:不同光处理下菌群微生物群落的相对丰度。(a) 相对丰度热图(*标注PPB类群);(b) 各处理的PPB相对丰度(柱上大写字母表示p<0.05的显著性差异)。
图示信息:a为以菌类为行、以初始菌群及蓝/红/白/黄为列的热图,色标由红(0%)经黄到绿(76%);b为PPB总相对丰度的柱状图(含误差棒与显著性字母)。
论文结果:热图显示 Rhodopseudomonas 与 Rhodomicrobium 在蓝、白、黄光下较初始菌群与红光更富集(偏绿),而 Pseudomonas、部分Clostridia相关类群、Acinetobacter、Lysinibacillus 等在特定处理下减少(偏红)。PPB总丰度约为:初始菌群12%(D组)、蓝光51%(BC)、红光17%(D)、白光75%(A)、黄光69%(AB)。
研究意义:证明光色可显著且可重复地重塑菌群结构并提升PPB份额,白光效果最强;PPB丰度仅反映相对组成,不能直接等同于PPB绝对生物量或功能活性。
Fig. 4:不同光色处理间共有与特有类群(OTU)分布的Venn图。I为初始菌群,B为蓝光,Y为黄光,R为红光,W为白光。
Fig. 4:不同光色处理间共有与特有类群(OTU)分布的Venn图。I为初始菌群,B为蓝光,Y为黄光,R为红光,W为白光。
图示信息:五套重叠椭圆组成的五元Venn图,各重叠区域以字母组合标注;右侧列出与各区域代码对应的类群名称框。
论文结果:五处理共有的核心微生物组(IWRYB)包括 Dysgonomonas mossii、Rhodopseudomonas、Macellibacteroides fermentans、Anaerotignum propionicum、Paraclostridium。各光色还出现特有类群,如红光特有 Acinetobacter modestus、Paenibacillus、Brevundimonas diminuta、Alkalihalophilus pseudofirmus、Bacillus;WR共有 Pseudomonas;RY共有 Lysinibacillus、Muricomes;蓝光特有 Xanthobacteraceae;初始菌群特有 Bacteroidales 等。
研究意义:说明尽管核心菌群被保留,不同光谱仍导致各处理出现专属类群,多数新出现类群并非光养菌(如蓝光通过光受体调控非光养菌的 motility、生物膜与基因表达),提示光色对菌群的重塑不限于PPB本身。
Fig. 5:白、红、蓝、黄光照射下菌群α多样性指数比较,分别给出(a) Shannon、(b) Chao 1、(c) Simpson、(d) 基于丰度的覆盖估计量(ACE)的点图。
Fig. 5:白、红、蓝、黄光照射下菌群α多样性指数比较,分别给出(a) Shannon、(b) Chao 1、(c) Simpson、(d) 基于丰度的覆盖估计量(ACE)的点图。
图示信息:四个点图面板,横轴为样本(White、Red、Blue、Yellow),纵轴为对应多样性指数。
论文结果:红光样本在四项指数上均最高:Shannon约3.05、Simpson约0.91、Chao1约1020、ACE约1040;蓝光次之(约1.9、0.71、490、470),黄光约1.6、0.55、640、590,白光最低(约1.2、0.42、450、410)。
研究意义:多样性结果与Fig. 2d、3b一致:红光下PPB相对丰度低、其他细菌比例高;白光的Rhodopseudomonas主导伴随着最低的整体细菌富集度,说明高PPB丰度以群落多样性下降为代价。
Fig. 6:光色对增值产物产量与COD去除的影响(n=3)。(a) 细菌叶绿素产率;(b) 类胡萝卜素产率;(c) 生物量浓度;(d) 蛋白产率;(e) PHB产率;(f) COD去除率。柱上大写字母表示处理间p<0.05的显著性差异,CDW为细胞干重。
Fig. 6:光色对增值产物产量与COD去除的影响(n=3)。(a) 细菌叶绿素产率;(b) 类胡萝卜素产率;(c) 生物量浓度;(d) 蛋白产率;(e) PHB产率;(f) COD去除率。柱上大写字母表示处理间p<0.05的显著性差异,CDW为细胞干重。
图示信息:六幅柱状图(3行2列),每幅比较Blue、Red、White、Yellow四处理,含误差棒与显著性字母。
论文结果:细菌叶绿素:红光最高(约6300 mg/g CDW,A组),蓝/白/黄相近(约4100–4200,B组)。类胡萝卜素:红光最高(约400 mg/g CDW,A组),其余约250–270(B组)。生物量:白(约1.43 g/L)与黄(约1.50)最高(A组),蓝居中(约1.25,AB),红最低(约0.82,C)。蛋白:红光最高(约800 mg/g CDW,A),蓝(约740)、白(约700)、黄(约670)无显著差异(AB)。PHB:白光最高(约3.4 mg/g CDW,A),蓝(约2.3)、红(约2.5)、黄(约2.2)为B组。COD去除:白最高(约70%,A),黄(约65%,AB),蓝(约34%,BC),红最低(约22%,C)。
研究意义:同一菌群在光色调控下呈现明确的代谢权衡:红光把资源导向光合色素与蛋白合成而牺牲生物量与COD去除,白光/黄光则把光能导向细胞分裂、PHB积累与有机质降解;各面板读值为图形估读,具体数值以原文柱高为准。
Table 1:猪肉加工废水特征(无对应原图,仅文字解读)
图示信息:表格列出废水常规指标与脂肪酸组成。
论文结果:COD 448.701±32.500 mg/L,TOC 217.551±51.201 mg/L,TN 208.910±12.001 mg/L,亚硝酸盐氮0.024±0.012 mg/L,硝酸盐氮0.005±0.010 mg/L,TKN 208.881±21.551 mg/L,总磷1.501±0.400 mg/L,脂肪110.000±17.320 mg/L(n=3);脂肪酸(g/100 g总提取脂肪酸)以硬脂酸0.063±0.120、棕榈酸0.049±0.021、丁酸0.031±0.000、二十碳三烯酸0.019±0.012、二十二碳六烯酸0.016±0.002等为主,其余多种脂肪酸含量在0.001–0.008 g/100 g区间。
研究意义:该废水C:N:P为145:139:1,与常规认为适宜的100:5:1差异很大,氮高碳低;丰富的脂肪酸来自废水塘内源细菌的脂质分解,为PPB提供易利用碳源,也解释了PPB在低C/N下仍可代谢脂类底物的原因。
Table 2:使用含PPB菌群进行污水处理与生物产品生产的批次(10天)电力成本(无对应原图,仅文字解读)
图示信息:表格按蓝、红、白、黄四种光照列出能耗(Kw)与总电费(USD)。
论文结果:蓝光:8.64 Kw、1.10 USD;红光:12.96 Kw、1.65 USD;白光:12.96 Kw、1.65 USD;黄光:8.64 Kw、1.10 USD。
研究意义:以光色提升PPB性能的成本很低,且可通过选择黄光等较低能耗光照在保证PPB丰度的同时降低电费;该成本核算基于实验室条件与当地电价,未含灯具投资与规模化损耗。

机制小结

  • PPB色素吸收谱决定其竞争优势:细菌叶绿素吸收红外/长波长光产生化学能,类胡萝卜素作为辅助色素传递能量并保护细胞抗氧化,故在匹配其吸收带的光色下PPB占优。
  • 白光(465 nm,蓝与广谱黄成分)诱导PPB形成B800-850型LH2捕光复合体,可跨广谱(特别是800–850 nm近红外)高效捕能,从而给 Rhodopseudomonas 带来竞争性优势;其蓝峰可能同时抑制色素合成,故白光色素产率低。
  • 红光(616 nm)接近近红外,最有效刺激细菌叶绿素与类胡萝卜素合成;色素合成耗能高,细胞把能量与碳流转向构建捕光机构,可能以牺牲细胞分裂为代价(红光可致细胞变小),导致PPB丰度与生物量降低。
  • 蓝光(473 nm)能量高却色素合成低,或存在光抑制、可改变光系统平衡并降低色素含量;红光处理下留存PPB通过增强光合色素与效率进行补偿,使单细胞蛋白产率仍最高。
  • 脂质降解(甘油三酯水解为甘油与游离脂肪酸→乙酰-CoA→TCA循环)连接了碳源供给与蛋白/PHB合成,构成PPB与异养发酵菌的代谢协同:异养菌先水解大分子,PPB再利用其产物。
  • PHB积累与光吸收效率相关:广谱白光促进LH复合体组装并提高NADH水平,进而激活NADH依赖的PHB合成酶;丁酸、棕榈酸、硬脂酸等分解产生的乙酰-CoA为PHB前体。

工程与产业含义

  • 光色是一种不额外投加药剂、操作简单且成本低廉的菌群调控手段:白光可同时提高PPB丰度、生物量、PHB与COD去除,适合以“治水+产菌体/PHB”为目标的运行模式。
  • 红光适合以高值产物(细菌叶绿素、类胡萝卜素、微生物蛋白)为目标的运行模式,可提升单位生物量的色素与蛋白含量;两类模式可通过切换光色在同一系统中按需选择。
  • 10天批次照明电费仅1.10–1.65美元,黄光与蓝光能耗相同且黄光PPB丰度较高,提示在成本敏感场景可优先考虑黄光等较低能耗光谱。
  • 该策略直接服务于SDG 6(清洁水与卫生),但前提是初始菌群必须含有PPB(哪怕量很少),否则光色无法生效。
  • 工程放大时需解决LED布置与光均匀性、连续24 h供光下的散热与能耗,以及长周期运行下菌群演替带来的稳定性问题。

适用与不适用场景

✅ 适用场景
  • 以猪肉/屠宰等富含脂质的加工废水为基质、已天然含有少量PPB的菌群体系
  • 希望在不分离纯培养的前提下,按目标产物切换“增殖模式”或“产产物模式”的连续光照光生物处理
  • 需要低成本、低操作复杂度手段调控混合菌群结构的实验室或中试规模研究
⚠️ 不适用 / 需谨慎
  • 初始菌群中完全不含PPB的体系(方法依赖PPB的初始存在)
  • 以短周期、多样本快速评估为目的的场景(本研究仅10天单批次,未验证长期稳定)
  • 不掌握或不控制光色、仅使用环境自然光的开放系统(无法复现单色光选择压)

局限与不确定性

作者未解决 / 需要读者注意的问题
  • 研究周期较短(10天),作者明确指出需更长期研究方能阐明PPB菌群动态。
  • 仅基于16S rRNA基因的分类学组成,未直接评估微生物组的功能活性,无法确证代谢通路的实际运行。
  • 菌群分析以相对丰度为主,处理间绝对生物量差异与PPB绝对量未被独立验证。
  • 结果依赖特定菌群组成,作者认为本研究的集体响应与纯培养研究(蓝光或红外光最优)不一致,与该菌群的多PPB种组成有关,向其他废水/菌群迁移需重新验证。
  • 初始富集所用暖白光蓝峰可能不足以刺激PPB,作者以此解释初始丰度仅12%;该推测未单独实验验证。

数据 · 代码 · 经费 · 利益冲突

测序数据(16S rRNA)存放于NCBI BioProject PRJNA1312338;详细信息见E-supplementary data link与Supplementary Information(含Table S1与Fig. S1、S2)。经费来自孔敬大学基础基金、泰国国家科学研究与创新基金,以及泰国国家研究理事会(NRCT)中期研究资助(项目号N42A660395)。作者声明无已知竞争性经济利益或个人关系。

来源与链接

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