🧫 光合细菌产蛋白专题 · 文献解读

生物膜光生物反应器培养紫色光合细菌产单细胞蛋白:附着生长与悬浮生长的产品品质分野(红肉加工废水)

Application of purple phototrophic bacteria in a biofilm photobioreactor for single cell protein production: Biofilm vs suspended growth

紫色光合细菌PPB生物膜单细胞蛋白红肉加工废水面积产率粗蛋白灰分红外 LED鱼粉替代
本文在专题中的位置:这篇文章在专题中扮演“产品品质的分水岭”:它用同一台反应器、同一批废水,把附着生物膜与悬浮生物量并排测了一遍,量化地证明生物膜能把废水的惰性组分挡在产品之外(VS/TS >96% 对约 60%),从而使 PPB 单细胞蛋白的品质与进水组成解耦。同时它算了一笔照明能耗的账,得出人工光照下 SCP 路线不成立的结论,为后续的户外自然光工作直接铺路。

文献信息

英文题名Application of purple phototrophic bacteria in a biofilm photobioreactor for single cell protein production: Biofilm vs suspended growth
作者Tim Hülsen*, Elisa Marx Sander, Paul D. Jensen, Damien J. Batstone
期刊 / 年份Water Research · 2020 · 181, 115909
DOI10.1016/j.watres.2020.115909
文献类型研究论文
获取方式订阅期刊(Elsevier,© 2020 Elsevier Ltd. All rights reserved.)
15–20 g VS·m⁻²·d⁻¹
总面积产率
其中 57%–60% 以上以生物膜形式生长
>96% VS of TS
收获生物膜的有机组分占比
废水本身仅约 70%,悬浮相仅 52.6%–68.3%
644 ± 41 mg CP·g VS⁻¹
附着生物量的粗蛋白含量
总氨基酸 590 ± 122 mg·g VS⁻¹
最高 32.4% DM
刮膜收获时的干物质含量
常规为 12%–16% DM
5.8 W·m⁻²
批式阶段的平均光强
低于同类研究的 18–50 W·m⁻²
~$1400/t
仅照明一项的成本
按 $0.1 kWh⁻¹ 估算,作者判定不可行

一图不看也要知道的几件事

证据边界
证据来自单台 3.0 L 实验室反应器的一个连续流阶段(含启动共 44 d)加 12 个批次,无平行反应器重复;批式阶段的四个子相(BII a–d)各仅 3 个批次,因此“回流量提高 5 倍无影响”这类结论建立在 n=3 的对比上。废水为澳大利亚某红肉加工厂气浮单元出水的抓样,运回后 4 ℃ 冷藏预沉——原文特别注明现场排放温度约 38 ℃、部分脂肪在该温度下是液态,而在 4 ℃ 会聚集成固体并在上清层积累,这一冷藏效应改变了进水的固体形态。收获采用人工方式:批式期从反应器取出管子、随机刮 3 根再按管数外推,作者明确说明有残余生物量未被计入,且刮取过程的失水差异会影响最终固含量测定。悬浮相 PPB 产率并非直接称重,而是用附着生物量测得的 BChl/PPB 比换算得到,属间接估算。ICP-OES 的金属结果中 Al、As、Co、Pb、Se、Zn 的置信区间很大,原文自述仅具指示性。原文 Fig. 1–4 与 Table 1–2 可用于图文对照。

研究背景:为什么必须讨论“长在哪里”

把废水中的有机物与营养盐升级为单细胞蛋白(single cell protein, SCP)已被提出作为一条资源化替代路线,可用的底物包括乳品、饮料、酿造,以及屠宰场排水等食品加工废液。微藻与紫色光合细菌(PPB)都被用于从这些来源生产生物量,二者都以高碳产率与高营养盐捕获潜力为特征,分解代谢所需能量来自人工或自然光。

但今天绝大多数微藻生物量是在开放高速藻类塘(HRAP)的悬浮培养中生长的。HRAP 的优势是合理的面积产率(6.8 g·m⁻²·d⁻¹ 的现实值到 42 g·m⁻²·d⁻¹ 的理想值)与低廉的单位面积资本(约 $40·m⁻²)。而它的劣势——尤其在以废水为底物时——正是本文的出发点:培养体系不稳定、目标生物周期性丢失,以及生物量被不需要的废水组分污染。这些组分包括惰性颗粒、固体、重金属、外源污染物与病原体,它们倾向于在悬浮生物量中累积。原文的判断很直接:如此一来,几乎不可能把不需要的废水组分从 SCP 产品中分离出去。其它缺点还包括沉淀占地大、需要干燥、运行成本高,而收获与干燥往往主导总成本。

PPB 为什么值得单独试一次生物膜
混培养 PPB 的光需求远低于微藻(5–20 W·m⁻² 对 100–200 W·m⁻²),并且独家具备利用红外(IR)光的能力,因而即使在非无菌的高强度废水中也能实现有效选择;其蛋白含量一般约 60%,已被测试作为鱼类与家禽饲料中鱼粉与豆粕的替代。然而文献中微藻生物膜系统备受关注,PPB 生物膜的研究却极为有限,仅有一项在内溢流反应器中的评估。原文进一步论证:以悬浮方式做一级处理的 PPB 系统比用于精处理的微藻更易受源水污染,也更易因需要水解/产酸的伴生菌群而被其它细菌“微生物稀释”,尤其在省略预酸化与除固等预处理时。基于生物膜的 PPB 系统则可以(a)最小化源水污染(大部分污染物留在主流),(b)限制伴生群落(水解与产酸发生在悬浮物中),(c)通过机械手段在相对高浓度下直接收获生物膜。

因此本文用一个带浸没式红外照明表面的封闭光生物反应器处理预沉红肉加工废水,围绕三个问题展开:a) 总生物量中有多少被并入生物膜?b) 生物膜的组成如何,是否适合作为单细胞蛋白产品?c) 它与传统蛋白源相比处于什么位置?

体系与方法

Fig. 1
Fig. 1 A picture of the BPBR reactor (left) and a schematic representation with the main body with internally illuminated tubes (T1), condensation trap (T2), gas bag (T3), water lock (T4), gas compressor (C1) and feed or recirculation pump (P1). Solid, black lines represent influent/effluent circuits and dashed line represents liquid recirculation circuit used instead of gas recycling during batch operation.
图示信息左侧为反应器实物照片:圆柱形主体带上下法兰,内部竖插一束透明管;两个箭头分别以黑色标注 “LEDs”(指向管束内部)与白色标注 “Perspex tubes”(指向下方管体),可见螺栓法兰、管路与实验台。右侧为工艺线图,标注件包括 P1(进料/回流泵,带三角底座的圆圈)、C1(气体压缩机)、T2(冷凝罐)、T3(气袋)、T4(水封瓶)以及 T1(带锥形底、内含竖向 LED 管柱的矩形主体),另有若干蝶阀符号与锥底出口处的三通阀。线型区分为:粗实黑线是进出水液路,点划黑线是回到 P1 的液体回流回路,细灰线是通往 C1/T2 的气路。
论文结果对应参数:3.0 L 圆柱形有机玻璃主体(直径×高 150×250 mm)配法兰锥底;反应器盖上装 17 根密封空心有机玻璃管(外径/内径 15/13 mm,长 250 mm),浸入液面 180 mm,形成有效受光面 0.14 m²、受光面体比 46.7 m²·m⁻³。管内由两条相对布置的柔性可调光红外 LED 灯带(850 nm)由内向外照射反应器,光强范围 5.8–16.0 W·m⁻²,辐照场分布用光谱辐射计沿受光面多点测定。反应器另配内部橡胶刮片系统用于收获生物量。混合由压缩机经锥底回流顶空气体实现(连续运行模式),并用 3 L 气袋扩展顶空体积(每次取样时用 N₂ 吹扫回填);批式阶段第 1–3 批仍用气体回流,其后改为经 P1 的液体回流。
研究意义这个“由内向外照明的浸没管束”是本文最值得注意的构型创新。它同时解决了两件事:把受光面从反应器外壁搬进液体内部(受光面体比达 46.7 m²·m⁻³,远高于外壁照明的构型),并把生物膜长在可以整根取出、单独刮取的载体上。代价也很清楚:LED 的发热直接抬高液温(16 W·m⁻² 时 36 ℃、5.8 W·m⁻² 时 33 ℃),原文明确指出这种温升本身就限制了系统可施加的辐照上限——这是内部照明构型的一个内在天花板。
废水澳大利亚某红肉加工厂(Australian Country Choice)气浮(DAF)单元出口的抓样,20 L 塑料桶盛装、运输 1 h 后 4 ℃ 冷藏,在冷藏容器内静沉后进料
进水组成(n=32,均值(标准差),mg·L⁻¹)TCOD 3534 (1905)、SCOD 1600 (484)、TN 220 (71)、NH₄–N 78 (36)、TP 24 (5.9);预沉后仍含大量颗粒物(总固体 2.2 g·L⁻¹,其中 VS 占 70%)
接种接入 10 v/v% 来自生活污水富集培养物的 PPB(约 1.0 g VS·L⁻¹),测序显示接种物含 50% PPB,以 Rhodobacter sp. 为主(31%)
连续阶段室温 22 ℃ 运行、HRT 2 d、VLR 约 2.6 g COD·L⁻¹·d⁻¹、气体回流 6.0 L·min⁻¹;启动前 16 d 光强约 16 W·m⁻²,此后同参数运行但间歇收获生物量以把 SRT 控制在 3 d(第 16–44 天为 Phase BI)。该阶段 LED 使水温达 36 ℃、pH 7.2
批式阶段12 个批次,光强降到平均 5.8 W·m⁻²(水温 33 ℃);6 个批次 3 d SRT、6 个批次 2 d SRT,见下表
批式收获每批结束(tend)取出管子、随机刮 3 根并按受光管总数外推;随后所有管子用水与刷洁具清洗,弃去 75% 反应器体积、保留 25% 作为下一批接种,再补入废水并用 N₂ 吹扫
蛋白与氨基酸蛋白含量按 NH₄–N 与 TKN 计算(Eding et al., 2006);氨基酸样品先在 6 M HCl、110 ℃ 下预水解 24 h,调 pH 至 8–10 后用 HPLC 定量
色素以丙酮:甲醇 7:2 提取、冰上超声 10 min;475 nm 测总类胡萝卜素(按螺菌红素吸光系数 ε=94000 M⁻¹·cm⁻¹)、771 nm 测细菌叶绿素(BChl A 系数 65300 M⁻¹·cm⁻¹),按比尔—朗伯定律计算
群落分析16S rRNA 双端扩增子测序(926F/1392wR,Illumina MiSeq);cutadapt 去引物、Trimmomatic 修剪(4 碱基滑窗、均值质量 15,弃 <250 bp)、QIIME2 处理并用 DADA2 去噪,再 BLAST 比对 SILVA/UNITE(99% 同一性聚类)
产率的两种算法Attached harvested:实际称重并表征收获的 PPB 生物量;Attached mass balance:以 t0 与 tend 的 TCOD 浓度差乘反应器体积,假定该差值即为附着生物膜(后者把经甲烷的厌氧损失也算作生物量产出,但顶空 CH₄ 浓度很低,<0.8%)。悬浮相产率则用附着生物量测得的 BChl/PPB VS 比换算液相 BChl 浓度而得
统计单因素与双因素 ANOVA(Matlab anovan);金属含量比较先做主成分分析(pca)再做 anovan;进水变异以标准差(括号)表示,输出与计算参数以双尾 t 检验的 95% 置信区间(±)表示
表 1 连续与批式各阶段的运行条件(改绘自原文 Table 1)
阶段混合方式回流量 (L·min⁻¹)批长 (d)VLR (g COD·L⁻¹·d⁻¹)
Continuous BI气体6.0HRT 2 d(连续)2.6
Batch 1–3(BII a)气体6.032.3
Batch 4–6(BII b)液体0.630.7
Batch 7–9(BII c)液体0.622.0
Batch 10–12(BII d)液体3.021.7

主要结果(原文 Fig. 2–4 与 Table 2)

Fig. 2
Fig. 2 A - Biofilm photo bioreactor filled with red meat processing wastewater. B – internals with PPB biofilm after installing the liquid recycle and C - BPBR internals with attached PPB biofilm and scum layer during continuous operation and gas recycle.
图示信息三张照片。A:反应器在运行中的整体外观,透过透明外壁可见浑浊的红棕/鲑红色 PPB 菌液,内部管束被遮住,壁上有隐约的容积刻度;上下为黑色法兰环与螺栓,白色箭头标注 “Perspex tubes”。B:取出后置于白色托盘上的管束,每根有机玻璃管表面覆盖深红棕至栗色的 PPB 生物膜(图上有竖排白字标注 “PPB biofilm”),管的上段呈较浅的棕/琥珀色,即原液面以上部分。C:另一组管束,可见顶部刮片(标注 wiper)之下积聚了一层厚的浅米色/奶油色浮渣(scum layer),其下方才是深红棕色的 PPB 生物膜。
论文结果连续运行的头 7 天废水颜色即转为红色(Fig. 2A),PPB 生物量(经群落分析确认)以紫色菌垫附着在有机玻璃管周围(Fig. 2B),说明在浸没受光面上红外选择是有效的。但气体回流在顶空造成了浮渣层(Fig. 2C):连续期的物料平衡面积产率为 12.4 ± 5.6 g VS·m⁻²·d⁻¹,而实际收获量低 50% 以上,仅 5.6 ± 3.2 g VS·m⁻²·d⁻¹。除浮渣外,刮拭后 PPB 生物膜会重新悬浮进主体液相而未被有效回收。批式的头 3 批(BII a)仍用气体回流,TCOD 去除速率虽高达 1.7 g·L⁻¹·d⁻¹,但这是浮渣堆积的结果而非生物量生长,去除的 COD 中只有 20% 被回收为生物量。此后改为液体回流,问题消除。
研究意义这组照片解释了一个容易被数据掩盖的工程事实:混合方式决定收获率。气体回流把疏水物质(红肉废水中的脂肪)浮选到顶空形成浮渣,既虚高了 COD 去除速率,又把本该成膜的碳带走了。B 与 C 两图的对照——干净的深红棕菌膜与被奶油色浮渣覆盖的菌膜——就是液体回流与气体回流的直观差别。对含脂肪的屠宰类废水,这条经验值得单独记住:别用气体回流做混合。同时 A 图中管上段较浅的颜色说明成膜严格发生在浸没的受光段,验证了受光面积计算的口径。
Fig. 3
Fig. 3 (A) - TCOD (black), TN (dark grey) and TP (light grey) removal in the biofilm photobioreactor, (B) the TCOD, SCOD (black, dotted), TN (x10) and TP (x100) removal rates and C - the attached, mass balance based areal productivities (dotted), the actual harvested attached biomass (black) and the suspended areal productivities (white) over the continuous and the batch operation. * scum formation due to gas recycling.
图示信息三个上下排列的面板共用同一横轴的 13 个类别:Cont. 与 B1–B12,用虚线分隔并以顶部括号标注 Continuous BI、BII a(B1–B3)、BII b(B4–B6)、BII c(B7–B9)、BII d(B10–B12)。面板 A 纵轴为 “COD, TN and TP removal (%)” 0–80(每 10 一格),每类三根柱:黑色 TCOD、深灰 TN、浅灰 TP;Cont. 一组带误差棒与两个星号。TCOD 在 BII a–b 达到峰值(B2 约 65%、B3 约 67%、B4 约 66%、B5 约 69%、B6 约 61%),在 BII c–d 回落到 39%–58%;TN 与 TP 多在 20%–45%。面板 B 纵轴为 “COD, TN (×10) and TP (×100) removal rates (mg·L⁻¹·d⁻¹)” 0–1000,四根柱为黑色 TCOD、点纹 SCOD、深灰 TN、浅灰 TP;Cont.、B1、B2 的 TCOD 柱超出量程,速率在 B7–B12 升高(TCOD 750–980)。面板 C 纵轴为 “PPB areal productivity (g VS·m⁻²·d⁻¹)” 0–30,点纹(实际收获的附着量)与白色(悬浮量)堆叠柱与黑色柱(按物料平衡的附着量)并列,星号标出 Cont. 与 B1–B3,最高总量约 19–20 出现在 BII c。
论文结果连续期(第 16–44 天)28 d 内平均去除 42% TCOD、70% SCOD、34% TN 与 39% TP,体积 COD 转化 1.1 ± 0.2 g TCOD·L⁻¹·d⁻¹ 与 0.66 g SCOD·L⁻¹·d⁻¹,污泥负荷率 0.9 g COD·g VS⁻¹。批次 4–6(BII b,3 d 批、液体回流 0.6 L·min⁻¹、VLR 0.7 g TCOD·L⁻¹·d⁻¹)给出全程最好的去除率:SCOD、TN、TP 的体积去除量为 193、21 与 2.6 mg·L⁻¹·d⁻¹,对应 66% COD、43% N、41% P;面积产率(物料平衡)5.8 ± 2.7 g VS·m⁻²·d⁻¹,其中 70% 在 10.6% DM 下被人工收获。批次 7–9(BII c)把批长从 3 d 缩到 2 d、VLR 提到 >1.7 g TCOD·L⁻¹·d⁻¹ 后,去除率下降但单位反应器体积的去除速率翻了一倍以上:SCOD 522 (82) mg·L⁻¹·d⁻¹、TN 44 (11)、TP 4.5 (0.8) mg·L⁻¹·d⁻¹;表观附着面积产率升到 11.5 g VS·m⁻²·d⁻¹(其中 6.6 ± 0.5 被收获,n=6),加上 7.0 ± 1.5 的悬浮生长,总面积产率达 18.5 ± 1.5 g VS·m⁻²·d⁻¹,超过 60% 的 PPB 生物量为附着态,收获固含量 13.1% DM(3 d 批时为 10.2%)。批次 10–12(BII d)把回流量提高 5 倍到 3.0 L·min⁻¹,去除率、去除速率与面积产率均与 BII c 相似(总表观面积产率 17.0 g VS·m⁻²·d⁻¹、60% 为附着),说明回流量对性能与生物膜几乎没有影响;但收获固含量升到 20% DM、峰值 32.4% DM,原文归因于收获时数分钟的延迟造成蒸发与滴水。各批 tend 的平均 VFA-COD 仅 14–20 mg·L⁻¹。
研究意义面板 C 的三色柱是全文的核心图:它把“产了多少”“收到了多少”“悬浮跑掉了多少”三件事同时摊开。连续期与 BII a 的星号(浮渣)正对应黑柱远高于点纹柱的缺口,即产率被高估、收获被低估;进入液体回流后两者才靠拢。而 tend 的 VFA-COD 只有 14–20 mg·L⁻¹ 这个细节至关重要:它说明水解是限速步骤(废水是颗粒态的),碳的可利用性受限进而压低了生物量产率。作者由此给出的工艺判断是——预发酵优于反应器内水解,因为后者会降低 VLR。另一条实用结论是批长与负荷的权衡:3 d 批给出更高的去除率(适合以出水达标为目标),2 d 批给出更高的体积速率与更高的收获固含量(适合以产品为目标)。
表 2 附着(A)与悬浮(S)PPB 生物量在各批段的组成(改绘自原文 Table 2,± 为 95% 置信区间;n.a. 为未测)
参数单位B1–3B4–6B7–12
VSg·L⁻¹A61 ± 1597 ± 15.6155 ± 29.2
VSg·L⁻¹S1.3 ± 1.80.4 ± 0.41.0 ± 0.29
TS/VS%VS of TSA99.8 ± 6.696 ± 2.894 ± 1.4
TS/VS%VS of TSS68.3 ± 8.752.6 ± 1160.4 ± 12.7
TCOD/VSmg COD·g VS⁻¹A1764 ± 601750 ± 381770 ± 47
TCOD/VSmg COD·g VS⁻¹S1964 ± 8951692 ± 6071468 ± 123
粗蛋白mg·g VS⁻¹A643 ± 30636 ± 13624 ± 48
粗蛋白mg·g VS⁻¹S621 ± 197604 ± 97415 ± 87
mg N·g VS⁻¹A103 ± 4.9102 ± 2.1106 ± 3.3
mg N·g VS⁻¹S130 ± 80173 ± 122145 ± 60
氨基酸mg·g VS⁻¹An.a.656605 ± 80
氨基酸mg·g VS⁻¹Sn.a.175304 ± 378
mg P·g VS⁻¹A13.6 ± 1.113.3 ± 0.313.4 ± 0.4
mg P·g VS⁻¹S15.2 ± 9.023.4 ± 22.514.2 ± 4.4
总 BChlmg·kg VS⁻¹A28.222.2 ± 0.823.9 ± 0.5
总 BChlmg·kg VS⁻¹S10.013.2 ± 1010.2 ± 1.5
总类胡萝卜素mg·kg VS⁻¹A12.49.9 ± 0.411.4 ± 2.0
总类胡萝卜素mg·kg VS⁻¹S4.36.1 ± 4.95.3 ± 0.5

产品一致性是本文最强的结论。 附着生物量在 12%–16% DM 下收获,粗蛋白约 644 ± 41 mg CP·g VS⁻¹,总氨基酸 590 ± 122 mg·g VS⁻¹(n=7)。按最后 6 个批次(BII c、d)的平均面积产率折算,该蛋白含量对应附着蛋白产量 6.9 ± 0.7 g CP·m⁻²·d⁻¹ 或 322 ± 33 g CP·m⁻³·d⁻¹,约相当于所投加 SCOD 的 60%。统计上,各次收获之间附着生物量的 TCOD/VS、VS/TS、CP、N、P、BChl 与类胡萝卜素均无显著差异(p > 0.05),金属组成的主成分同样无差异(p = 0.6)。收获生物量的有机组分超过 96% VS of TS,远高于废水本身的约 70%。相反,悬浮生物量蛋白与氨基酸更少(570 与 277.5 ± 114 mg·g VS⁻¹)、惰性更多(62% VS/TS);虽然悬浮相自身随时间也无显著变化,但附着相与悬浮相之间在 CP、TN、TP、BChl 与类胡萝卜素上全部显著不同(p 均 <0.005),金属含量亦显著不同(p<0.05)。

金属:生物膜总体更干净,但锌和铝反而富集
ICP-OES 测定的大多数元素在生物膜中比悬浮相低 12%–98.8%,但平均铝与锌在生物膜中高出最多 6.5 倍。文献已报道 Rhodobacter sp. 与 Rhodopseudomonas sp. 对这些成分有生物吸附。铝从毒性角度不算特别问题,锌则视目标应用可能有正面或负面影响。本文得到的生物膜中相关重金属(As、Cr、Cu、Pb、Zn)含量高于常用水产饲料原料(干鱼溶浆、胆碱、玉米预糊化粉、全麦粉、小麦谷蛋白、鱼粉、家禽粉与血粉),但在配方中可能是可控的(例如某些饲料本身就添加锌)。需注意 Al、As、Co、Pb、Se、Zn 的置信区间很大,ICP 结果仅具指示性
Fig. 4
Fig. 4 Microbial community analysis of the BPBR. Influent represents the Red meat WW, susp = suspended biomass; att = attached biomass; (t0) beginning of batch; (t2 and t3) end of the batch. Cont. represents the continuous operation period and inoculum refers to the initial inoculum used to start the reactor.
图示信息单个镜像(背靠背)堆叠柱状图。纵轴为 Relative Abundance:向上自 0 到 1(每 0.2 一格)对应标注为 “Other than PPB” 的类群,向下自 0 到 0.8 对应以品红标注的 “PPB” 部分,中间有一条零线。图例分两块、以品红横线分隔:上块为 5 个 PPB 属(Allochromatium、Blastochloris、Rhodobacter、Rhodopseudomonas、Rhodoplanes,以紫/粉底色加点或条纹区分),下块为约 24 个非 PPB 类群(Anaerolineaceae、Methanospirillaceae、Methanobacteriaceae、ABY1、Actinobacteria、Alphaproteobacteria、Babeliae、Bacilli、Bacteroidia、Clostridia、Coriobacteriia、Erysipelotrichia、Fimbriimonadia、Fusobacteriia、Gammaproteobacteria、Holophagae、Ignavibacteria、Microgenomatia、Mollicutes、Negativicutes、Phycisphaerae、Planctomycetacia、Spirochaetia、Synergistia、Eukaryota)以及黑色的 Others <1%。横轴 18 个类别依次为 Inoculum、Influent、Cont. Effl (susp)、Cont. Susp+Att,以及 B2 t0 susp、B2 t3 susp、B2 t3 att、B4 t3 susp、B4 t3 att、B6 t0/t3 susp、B6 t3 att、B7 t2 att、B9 t0/t2 susp、B9 t2 att、B11 t2 att、B12 t2 att。趋势是:附着生物膜样品的 PPB 占比最高(约 0.7–0.78),进水几乎为零。
论文结果识别到的主要 PPB 属既包括紫色非硫细菌(PNSB)如 Rhodobacter sp. 与 Rhodopseudomonas sp.,也包括紫色硫细菌(PSB)如 Thiobaca sp. 与 Allochromatium sp.,这些属此前已在工程化污水处理系统中被报道。附着与悬浮生物量的分析都确认 PPB 占优,相对丰度在生物膜与反应器液相中最高分别达 77% 与 56%,且生物膜在 tend 的丰度普遍高于悬浮相(平均 57% 对 43%)。主成分分析显示 t0 的接种物与 tend 的悬浮相主成分相似,而 tend 的生物膜从两者中分离出来;PCA 图还显示优势属从前 6 个批次的 Rhodopseudomonas sp. 向后 6 个批次的 Rhodobacter sp. 迁移,指向批长由 3 d 缩短到 2 d 的影响,与批长同 tend 时 Rhodopseudomonas 相对丰度的弱相关(r = 0.62)吻合。除此之外,生物膜或悬浮相的 PPB、Rhodobacter、Rhodopseudomonas 与非 PPB 相对丰度同转化速率、收获生物量或批次条件均无显著相关。伴生群落中有常见厌氧菌,Methanobrevibacter sp. 的相对丰度从 t0 的平均 7.7% 降到 tend 悬浮相的 1.7% 与生物膜的 3.1%,Methanobacterium sp. 始终低于 0.13%,与顶空低甲烷浓度一致。
研究意义这张图从群落层面解释了产品品质差异的来源:生物膜不只是物理上更浓,生态上也更“纯”。PPB 富集度 57% 对 43% 的差距,加上生物膜中更高的 BChl 与类胡萝卜素(22.2–28.2 对 10.0–13.2 mg BChl·kg VS⁻¹),共同支撑了更高的蛋白与氨基酸含量。原文的机理推测是生长条件变化,例如成膜后悬浮相因遮光而供光减少。另一个有实用价值的发现是批长可以调控优势属:缩短 SRT 到 2 d 推向 Rhodobacter(这与文献中光生物反应器里短 SRT 使 Rhodobacter 占优的报道一致)。目前两个属都是有效的光异养菌因而都可接受,但若将来要做精细化学品,这个可调性就变得重要。产甲烷菌丰度随运行下降则从群落侧确认了碳没有大量流向甲烷。

为什么生物膜路线成立:三条独立证据的会合

  1. 物理上:惰性组分留在液相。 收获生物膜的有机分数 >96% VS of TS,而进水只有 60%–70%,悬浮相为 52.6%–68.7%(与废水相当)。这意味着矿物固体被保留在悬浮态中,产品组成与废水组成实现了解耦——原文认为这正是把 PPB SCP 技术从小众市场推向整个农业工业的关键支撑。
  2. 生态上:PPB 被富集在膜里。 生物膜的 PPB 相对丰度 57%,悬浮相 43%;BChl 与类胡萝卜素在生物膜中分别高约 2 倍。生物膜的 BChl >20 mg·g VS⁻¹、总类胡萝卜素 >10 mg·g VS⁻¹(BChl/类胡萝卜素比 2.1),高于文献报道值,而两者都是潜在有价值的免疫营养饲料成分,有可能把产品价值提到基础蛋白价值之上。
  3. 经济上:省掉整条脱水链。 生物膜以约 16% DM(峰值 32.4%)被收获,而光合系统的收获可占总生产成本的 20%–30%(主要因为生物量稀)。原文认为,收获生物膜时气浮、离心机、各类过滤(真空、深床、错流、表面、压力等)或沉淀池等浓缩设备有可能被省掉(资本与运行双省),因为经过这些步骤后的干物质含量也很少超过 15%;此外不需要絮凝剂,又是一笔节省。

氨基酸谱的现实定位。 生物膜的氨基酸组成与在家禽加工废水上生长的混培养 PPB 谱相当,高于 Chlorella sp.,但低于鱼粉。原文明确判断:PPB 生物量可能适合作为鱼饲料的大宗成分,但不太可能在商业饲料中 100% 替代鱼粉,因为若干氨基酸(如甲硫氨酸与赖氨酸)相对不足。这一点已在尖吻鲈(barramundi)投喂试验中被证实——100% 替代导致体重增长显著低于对照,而 66% 与 33% 替代在 47 d 内无显著差异。作者也强调,在把 PPB(或一般微生物生物量)用作富蛋白饲料成分之前,还必须确定毒素、病原、外源污染物与核酸含量等产品安全因素;而能够长期产出组成一致的富蛋白产品是先决条件,这正是本文所解决的部分。

剪切不是主角,光可能才是
文献中提高液体回流与水力剪切通常能形成更致密、更稳定的生物膜,但本研究把回流量提高 5 倍(BII c 对 BII d)对性能与生物量产率都没有影响。原文指出关于混培养 PPB 生物膜形成与剪切效应的文献是空白的,并提议应当研究光的作用,它可能比剪切更相关。相关性分析显示 VLR 与 TCOD、SCOD、TN、TP 去除速率及生物膜产率均正相关(r > 0.8),因而与批长负相关;各去除速率之间以及与收获生物量之间也都正相关(r > 0.8)。

工程、经济与产业含义

照明的账必须先算。 本研究已经把光输入压到 5.8 W·m⁻²,显著低于其它研究的 18–50 W·m⁻²。但在 0.9 kg·m⁻³·d⁻¹ 的体积产率(约 17 g VS·m⁻²·d⁻¹)下,折算能量输入约 8.2 MWh·t⁻¹(29.5 GJ·t⁻¹)——这其实高于在更高辐照下报道的 22 GJ·t⁻¹。若只计附着生长(约 10 g VS·m⁻²·d⁻¹),能耗升到 13.9 MWh 或 50 GJ·t⁻¹。按较低的电价 $0.1 kWh⁻¹ 计算,仅照明一项就约 $1400·t⁻¹,原文认为这是禁止性的(更不用说灯具的资本成本)。结论非常明确:要做 SCP,PPB 必须在户外靠自然光生长以消除照明成本;而对类胡萝卜素(如番茄红素)或特定聚羟基脂肪酸酯(PHA)这类精细化学品,人工照明仍可能是一个选项。

运行模式选择连续与批式都能长出 PPB 生物膜,但批式在收膜上远为有效——连续模式下生物膜会解体并部分重新溶解,限制实际回收量。改善方向是调整混合与剪切以获得稳定紧实的生物膜
预处理建议tend 的低 VFA 水平表明水解受限(源于废水的颗粒态性质),因此预发酵优于反应器内水解(后者会降低 VLR)。上游预酸化会把进水固体(脂肪、蛋白)转化为立即可利用的 VFA 与 NH₄–N,从而提高总去除率并可能缩短批长、提高产率
后处理选项可与好氧精处理(剩余 COD 可在氨氧化后用于反硝化)和/或膜过滤组合,后者会截留所有固态 COD、TN 与 TP 并大幅降低排放浓度;但会增加资本与运行成本,只在不需要后处理时才显得合理
改造现有厂的思路把 BPBR 作为穿流式前置单元改造既有污水厂:上游产 SCP,随后 COD、TN、TP 负荷降低 30%–50%,从而使厂区可以做小,或为现有厂腾出扩产余量。悬浮相 PPB 随出水排出虽降低总去除率,但若 PPB 单元位于既有处理链上游则未必构成问题
悬浮相的处置附着相可用工程化系统有效收获;悬浮相可用于接种平行反应器,但最终会随出水离开系统,除非回收——而回收就会引入微藻收获的全部成本
适用面PPB 已被报道可在温带(约 10 ℃)与高盐条件下应用,并已处理家禽、糖、红肉、乳品与食品加工等多种农业工业废液。固体含量很高的废水(如猪场)会放大附着系统的优势,但原文同时认为更易降解的食品加工废水可能是更好的选择

相对微藻光生物反应器的结构性优势。 原文列出的清单包括:没有产物(O₂)抑制、不需要 CO₂、pH 变化很小或没有、做的是一级处理而非二级/三级处理(因而底物更多)、得到的是 PPB 占优的培养物而非被稀释的藻—菌絮体、捕食更少(无好氧原生动物,目前尚未发现捕食者)、所需光输入更低及其对遮光的影响更小。最后一条尤其有意思——它有可能削弱产率的季节性波动(如冬季光照较少),但需要至少一年的日产量平均值来确认;这一点对光抑制也可能重要,同样需要户外验证。

劣势清单(原文自述)
可能需要滤过的阳光即只要红外部分(是否必需尚不确定);红外穿透差——在 PPB 生物量浓度 0.1 g·L⁻¹ 时,50% 的光会被实验室反应器顶部 3–4 cm 吸收,只有约 15% 到达腔体底部;以及研究与放大目前仍处于萌芽状态,投喂试验与安全性数据有限。此外,生物膜反应器按单位面积计的资本成本高于悬浮系统,而固定化与生物膜系统可能因光抑制、遮光与扩散限制而降低面积产率。

从产业化视角总结:本文的 BPBR 只实现了中等程度的 COD、N、P 去除,但产出了组成一致的、PPB 占优的生物膜。一致性对作为饲料、饲料添加剂或补充剂的价值评估是决定性的,且必须由投喂试验支撑。其附着面积产率(7.0–10 g VS·m⁻²·d⁻¹,悬浮约 7.4)与微藻系统的数据相当,并处于所报道藻类生物膜系统(1.28–2.6、5.5、4.5–7.6 g DW·m⁻²·d⁻¹)的高端;对应的粗蛋白生产速率最高 6.9 ± 0.7 g·m⁻²·d⁻¹ 或 322 ± 33 g·m⁻³·d⁻¹,可把所投 SCOD 的约 60% 回收为蛋白。光生物反应器构型上,平板或管式系统对附着生长很可能可行(壁面生长此前甚至被当作一种麻烦来报道)。

适用场景

不适用 / 需谨慎的场景

局限与不确定性

数据 · 代码 · 经费 · 利益冲突

数据可用性生物量组成的原始数据作为电子补充材料随文提供;补充材料(Table S1–S5、Fig. S1–S4)见 https://doi.org/10.1016/j.watres.2020.115909。
代码可用性原文未提供代码仓库;数据处理使用 Matlab(interp1、anovan、pca)与 Excel,测序分析使用 cutadapt v1.17、Trimmomatic v0.38、QIIME2 v2018.8.0、DADA2,数据库为 SILVA release 132 与 UNITE v7.2。
经费来源由 Australian Meat Processor Corporation(AMPC)资助(项目号 2017-1039)。
利益冲突原文声明:作者声明不存在已知的、可能影响本文所报道工作的竞争性经济利益或个人关系。

来源与链接

图片来源:订阅期刊论文,原文 Fig. 1–4 与 Table 1–2 按学术评述引用方式复用,版权归 Elsevier 及作者所有,来源见 DOI: 10.1016/j.watres.2020.115909。

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